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細胞破碎的原理與技術(shù)

更新時間:2020-12-25      點擊次數(shù):2698
 高壓均質(zhì)機是由一個高壓柱塞泵及特殊結(jié)構(gòu)的均質(zhì)閥組成,需處理的物料在柱塞所造成的高壓條件下進入可調(diào)節(jié)壓力大小的閥組中,失壓后的物料從可調(diào)節(jié)限流縫隙中以*的流速(1000米/秒,可達1500米/秒)噴出,撞在閥組件之一的沖擊環(huán)上 保持細胞活性的重要參數(shù)是溫度和時間,物料在高壓均質(zhì)閥內(nèi)部的約0.01秒的瞬間,在高壓的作用下溫度會上升到大約10~15℃。
通過均質(zhì)閥后在經(jīng)過高效換熱器的作用下,溫度在2~3秒作用會迅速下降,所以物料在溫度相對較高的條件下僅僅維持多3秒鐘。 滲透壓沖擊破碎法(osmotic shock) 滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,細胞內(nèi)水分便向外滲出,細胞發(fā)生收縮,當達到平衡后,將介質(zhì)快速稀釋,或?qū)⒓毎D(zhuǎn)入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內(nèi),引起細胞快速膨脹而破裂。 凍融破碎法(freezing and thawing) 將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,反覆多次而達到破壁作用。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂,從而增加細胞的親水性能,另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶,形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂。對于細胞壁較脆弱的菌體,可采用此法。 酶溶破碎法(enzyme lysis) 酶解是利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或*破壞后,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內(nèi)產(chǎn)物的通透性。溶菌酶(lysozyme)適用于革蘭氏陽性菌細胞的分解,應用于革蘭氏陰性菌時,需輔以EDTA使之更有效地作用于細胞壁。 真核細胞的細胞壁不同于原核細胞,需采用不同的酶。 化學破碎法(chemical treatment) 采用化學法處理可以溶解細胞或抽提胞內(nèi)組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機溶劑等化學試劑 去垢劑破碎法(detergents)